维普资讯 http://www.cqvip.com
实用医学杂志２００８年第２４卷第９期 银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤的保护作用 姚丹丹摘唐高兴 要 目的：通过观察银杏叶提取物（ＥＧＢ）对家兔肾缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤模型血清尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐 （Ｃｒ）含量和磺胺嘧啶代谢的影响，探讨ＥＧＢ对肾Ｉ／Ｒ损伤的保护作用。方法：２４只家兔随机分为假手术组（Ａ 组）、ＩＲ组（Ｂ组）和ＥＧＢ预处理组（Ｃ组）。Ｂ、Ｃ组家兔肾缺血４５ ｍｉｎ，再灌注４ ｈ建立家兔肾Ｉ／Ｒ损伤模型，ｃ 组加用ＥＧＢ预处理。于再灌注同时注射磺胺嘧啶，测定其分布半衰期（ｔ， 理）、消退半衰期（ｔ。 ｐ），并检测不同 时间点血清ＢＵＮ和Ｃｒ含量变化。同时观察肾组织病理学改变 结果：Ｂ组磺胺嘧啶的ｔ， ｄ与Ａ组相比明显缩 短．而ｔ， Ｂ明显延长（均Ｐ＜０．０５），其血清中ＢＵＮ、Ｃｒ含量亦明显升高（Ｐ＜０．０５），肾组织出现明显的病理改 变。而经ＥＧＢ预处理的ｃ组磺胺嘧啶的ｔｌ ｄ与Ｂ组相比延长，ｔｌ／２ｐ缩短，血清中ＢＵＮ、Ｃｒ含量降低．差异有显 著性（Ｐ＜０．０５），肾组织病理改变明显减轻。结论：ＥＧＢ对肾Ｉ／Ｒ损伤有一定的保护作用。 关键词 再灌注损伤 银杏叶提取物 肾脏 药物代谢动力学 Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏ ｂｆｌｏｂａ ｅｘｔｒａｃｔ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ＹＡ ０ Ｄａｎ—ｄａｎ，ＴＡ ＮＧ Ｇａｏ・ｘｉｎｇ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｎｇｈｕａ Ｂｒａｎｃｈ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ胁ｄ ｃ０ ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０９２５，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ ｅｘｔｒａｃｔ（ＥＧＢ）ｉｎ ｒｅｎａｌ ｉｓｅｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｉ／Ｒ） ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｒｅｎａｌ Ｌ／Ｒ ｉｎｊｕｒｙ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｌｉｇａｔｉｎｇ ｌｅｆｔ ｒｅｎａｌ ａｒｔｅｒｙ ｆｏｒ ４５ ｍｉｎ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｎｇ ｆｏｒ ２４０ ｍｉｎ．ＥＧＢ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ ｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ（ｔｌ／２ ｄ）ａｎｄ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｈａｌｂｌｉ￣（ｔｌ／２ ｐ）ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ，ＳＯ ｗｅｒｅ ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ（ＢＵＮ），ａｎｄ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ（Ｃｒ）ａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ．Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｎａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔ１／２ ｄ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｙ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ｂｕｔ ｔｌ／２ ｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｃｒ ａｎｄ ＢＵＮ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ｎｏｔａｂｌｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｎａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｉｎ Ｉ／Ｒ ｇｒｏｕｐ．Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＥＧＢ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｔ１／２ ｄ ａｎｄ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ｔｌ／２ ｐ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｃｒ ａｎｄ ＢＵＮ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ａｌｌｅｖｉａｔｅｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｉ／Ｒ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＥＧＢ ｐｌａｙｓ ａ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｉｎ ｒｅｎａｌ Ｌ／Ｒ ｉｎｊｕｒｙ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ ｅｘｔｒａｃｔ Ｋｉｄｎｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ 肾缺血再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉｃ．ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ｌ／Ｒ）损伤是 临床上常见的病理现象，是导致急性肾功能衰竭的最 常见原因，是肾损伤保护的重要研究课题，目前已有不 少相关研究［ ］。银杏叶提取物（ｇｉｎｇｋｏ ｂｉｌｏｂａ ｅｘｔｒａｃｔ， ＥＧＢ）所含的有效成分总黄酮苷和银杏内酯等具有广 泛的药理作用，对Ｉ／Ｒ损伤具有保护作用，国内外有大 量的研究报道，但其对Ｉ／Ｒ损伤肾脏的药物代谢动力 按文献［５］方法，于第６天，各组大鼠在戊巴比妥钠 麻醉下（腹腔注射３％戊巴比妥钠３０ ｍｇ／ｋｇ），腹部 正中切口，暴露双侧肾脏，结扎右肾动、静脉近心 端，切除右肾。在结扎肾动脉前，从髂总动脉取血备 学作用方面鲜有报道。本实验通过建立肾Ｉ／Ｒ损伤模 型，观察ＥＧＢ对肾脏Ｉ／Ｒ损伤后磺胺嘧啶代谢的影 响，以探讨其对肾Ｉ／Ｒ损伤的保护机制。 １材料与方法 １．１ 材料家兔２４只，雄性，体重２ ｋｇ左右，由广 测，并注射１００ ＩＵ肝素防止血管内凝血。仔细分离 左肾动脉，Ｂ、Ｃ组用无创血管夹夹闭４５ ｍｉｎ，再灌 注４ ｈ。再灌注同时注射１０％磺胺嘧啶５ ｍＬ／ｋｇ。并 于给药后不同时间点采血做磺胺嘧啶浓度的测定。 再灌注结束后取血，并取出左侧肾脏，分别按要求 保存。 １．２．２血清ＢＵＮ、Ｃｒ的测定ＢＵＮ的测定用二乙酰 法，Ｃｒ测定用苦味酸法，按试剂盒使用说明测定血清 ＢＵＮ、Ｃｒ的含量。 东省实验动物中心提供。血清尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐 （Ｃｒ）测定试剂盒由广州万孚生物制剂公司提供。 １．２方法 １．２．１动物分组及模型制备２４只家兔随机分为３ 组。Ａ组为假手术组。Ｂ组为Ｉ／Ｒ组．按１ ｍＬ／１Ｏ０ ｇ 生理盐水灌胃。Ｃ组为ＥＧＢ预处理组。按５０ ｍｇ／ｋｇ １．２．３磺胺嘧啶的分布半衰期（ｔ。 ｏｔ）和消退半衰期 （ｔ Ｂ）的测定计算磺胺嘧啶在注射后１～１５ ｍｉｎ 的ｔｌ／２ ｏｔ（半衰期ｔｌ／２＝ｌｇＣ￣／Ｃ Ｘ ２．３０３／ｋｅ）和注射后 ３０～１２０ ｍｉｎ ｔ ｐ。磺胺嘧啶浓度测定采用比色法． 计算吸光度Ａ值。 １．２．４ 肾组织学观察 肾脏在４％甲醛中固定。切 片，做ＨＥ染色，光镜下观察病理学改变。 １．３统计学处理统计学数据以 ４－Ｓ表示，统计学 ＥＧＢ灌胃［４３。各组均灌胃给药，每日１次，连续５ ｄ。 作者单位：５１０９２５广州医学院从化学院生理教研室 维普资讯 http://www.cqvip.com 实用医学杂志２００８年第２４卷第９期 处理采用ＳＰＳＳ １０．０软件进行方差分析及Ｄｕｎｎｅｔｔ—ｔ 检验。 ２结果 理改变，肾小管上皮细胞以变性为主，肾组织损伤明 显减轻。 ２．２ ＥＧＢ对Ｉ／Ｒ损伤所致血清ＢＵＮ、Ｃｒ改变的影 响 与Ａ组相比，Ｂ组ＢＵＮ及Ｃｒ含量显著增加（Ｐ ＜０．０５）。Ｃ组虽然与Ａ组相比ＢＵＮ及ｃｒ含量也显 著增加（Ｐ＜０．０５），但与Ｂ组比较ＢＵＮ及Ｃｒ含量已 有显著降低（Ｐ＜０．０５）。见表１。 ±ｓ．Ｉｘｍｍｏｌ／Ｌ ２．１ ＥＧＢ对肾组织病理学改变的影响 光镜下Ａ 组肾小球、肾小管结构正常；Ｂ组肾组织损伤明显． 肾小球红细胞增多，肾小管上皮细胞出现浑浊肿胀． 部分肾小管轮廓结构消失；Ｃ组肾小球未见明显病 表１ ＥＧＢ对Ｉ／Ｒ损伤所致血清ＢＵＮ、Ｃｒ改变的影响 注：与Ａ组比较，｝Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｂ组比较，△Ｐ＜Ｏ．０５ ２．３ ＥＧＢ对肾Ｉ／Ｒ损伤所致磺胺嘧啶半衰期改变 的影响 Ｂ组磺胺嘧啶的ｔ ｏ【明显短于Ａ组（Ｐ＜ ０．０５），ｔ Ｂ明显长于Ａ组（Ｐ＜０．０５）。Ｃ组磺胺嘧 啶的ｔ ｏ【与Ｂ组比明显延长，差异有显著性（Ｐ＜ ０．０５），ｔ Ｂ虽然长于Ａ组（Ｐ＜０．０５），但与Ｂ组比 较有显著缩短（Ｐ＜０．０５）。见表２。 表２ ＥＧＢ对肾Ｉ／Ｒ损伤所致磺胺嘧啶 半衰期改变的影响 ±ｓ．ｍｉｎ 部分通过远端小管重吸收．故影响其半衰期的主要 因素是肾脏的排泄功能。本研究发现，肾缺血４５ ｍｉｎ 再灌注４ ｈ，导致血清ＢＵＮ和ｃｒ明显升高，磺胺嘧 啶在体内的ｔｌ／２ｏｒ明显缩短、ｔｌｎ［３明显延长，肾组织有 明显病理损伤。应用ＥＧＢ预处理，可显著降低由于 肾Ｉ／Ｒ损伤引起的血清ＢＵＮ和Ｃｒ含量升高．延长 了磺胺嘧啶在体内的ｔｌ／２ｏｒ、缩短其ｔｌｎ［３，肾组织损伤 显著减轻。说明ＥＧＢ对家兔急性肾Ｉ／Ｒ损伤具有明 显的保护作用，与文献［６＿，］报道一致。本研究为临床 肾Ｉ／Ｒ后的ＥＧＢ应用和安全用药提供一定的理论 基础和实验依据。 ４参考文献 ［１］吴卫真。余毅，余英豪，等．黄芪对肾缺血再灌注损伤的保护作 用［Ｊ］．中华泌尿外科杂志，２０００，２１（４）：２１１—２１２． ［２］夏安周。邢淑华，张召辉．银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤 的保护作用［Ｊ］．中国药理学通报。２００４，２０（７）：８３９—８４０． ［３］李令勋，苏泽轩．Ｔ淋巴细胞介导肝肾缺血再灌注损伤的研究 进展［Ｊ］．实用医学杂志，２００７，２３（２０）：３１４９—３１５０． ［４］周兰兰，马传庚．银杏叶提取物的促智作用研究［¨．安徽医科 大学学报，２００３，３５（４）：３２１． 注：与Ａ组比较，｝Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｂ组比较，Ｐ＜Ｏ．０５ ３讨论 肾脏是一个高灌注的器官，对Ｉ／Ｒ损伤十分敏 感，故临床上常见肾Ｉ／Ｒ损伤。大量研究表明，Ｉ／Ｒ 损伤主要与氧自由基引起的膜脂质过氧化密切相 关。ＥＧＢ的主要活性成分为总黄酮苷和银杏内酯。研 究表明，总黄酮苷能清除体内大量自由基，银杏内酯 具有抗氧化作用，能降低自由基释放引起的氧化应 激反应。 肝功能不全对药代动力学的影响众所周知，但 肾脏损伤对药代动力学的影响则鲜有文献报道。肾 脏在发生Ｉ／Ｒ损伤后，肾小球有效滤过率下降，肾小 管上皮细胞肿胀、变性坏死、脱落、阻塞肾小管，导致 ［５］Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ Ｐ Ａ， Ｂｒｏｗｎ Ｐ Ｊ，Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ Ｓ， ｅｔ ａ１．ｃａｌｐ￣ｍ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ一１ ｒｅｄｕｃｅｓ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，２００１，５９（６）：２０７３－２０８３． ［６］Ｏｚｔｕｒｋ Ｈ，Ａｌｄｅｍｉｒ Ｍ，Ｂｕｙｕｋｂａｙｒａｍ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｅｔ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｄｏｎｏｒ ｍｏｌｓｉｄｏｍｉｎｅ ｐｒｅｖｅｎｔ ｉｎ ｗａｒｍｉｓｅｈｅｍｉａ・ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｒｅｎａｌ——ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｐｈａｔｏｌｏｇｉｃｌａ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｕｒｏｌ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００１，３２（４）：６０１— ６０７． 药物在体内的蓄积，浓度居高不下，消除半衰期延 长。磺胺类药物主要经肝脏乙酰化失效，乙酰化后大 部分形成游离的乙酰化化合物经肾小球滤过排出， ［７］Ｓｉｎｇｈ Ｄ，Ｃｈｏｐｒａ Ｋ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎａｒｉｎｇｉｎ，ａ ｂｉｏｌｆａｖｏｎｏｉｄ ｏｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｎａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｐｈａｎｎａｅｏｌ Ｒｅｓ，２００４，５０（２）：１８７－１９３． （收稿：２００７—０９—２８修回：２００８一Ｏ１—２１）