(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 111773265 A(43)申请公布日 2020.10.16
(21)申请号 202010803663.2(22)申请日 2020.08.11
(71)申请人 江西中医药大学
地址 330000 江西省南昌市湾里区梅岭大
道1688号(72)发明人 邵峰 唐芳瑞 胡慧明 刘荣华
梅慧 申晨晓 朱清 权赫秀 (74)专利代理机构 深圳市鼎浩知识产权代理有
限公司 44544
代理人 包雪雷(51)Int.Cl.
A61K 36/48(2006.01)A61P 19/10(2006.01)
权利要求书1页 说明书4页
(54)发明名称
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用(57)摘要
本发明提供了一种降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用。该降香黄檀叶提取物可按下述方法得到：将降香黄檀叶经过水、乙醇或甲醇溶剂，进行化学成分提取，过滤提取液获得滤液，滤液通过减压浓缩，获得降香黄檀叶提取物。经本发明药理试验研究表明降香黄檀叶提取物具有良好的抗骨质疏松作用，可用于制备预防或治疗骨质疏松的药品。
CN 111773265 ACN 111773265 A
权 利 要 求 书
1/1页
1.一种降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述降香黄檀叶提取物的制备方法为：将降香黄檀叶用水、乙醇或甲醇提取，得到滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物；其中，水提取：将降香黄檀叶加1至10倍量的水，在60℃至100℃温浸提取1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液；乙醇提取：将降香黄檀叶加1至10倍量的20%~90%的乙醇，在60℃至100℃温浸提取1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液；甲醇提取：将降香黄檀叶加1至10倍量的甲醇，经超声提取，提取1-3小时，得到提取液，过滤，获得滤液。
2
CN 111773265 A
说 明 书
1/4页
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的
应用
技术领域
[0001]本发明涉及医药技术领域，具体涉及降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用。
背景技术
[0002]骨质疏松症是一种以骨密度降低、骨微结构破坏、骨脆性增加及骨折频发为临床表现的全身性骨代谢疾病。据2010年，世界卫生组织统计资料显示，全世界有超过2亿骨质疏松症患者，其中，绝经后女性占三分之一。体内雌激素水平快速下降，导致骨代谢紊乱加重是绝经后女性易患骨质疏松症的主要原因。传统的雌激素替代疗法会导致患者易产生高血凝、高血压及水肿等副作用，大幅增加罹患子宫内膜癌、乳腺癌等恶性肿瘤的风险。此外，采用双磷酸盐、降钙素及氟化物等西药治疗绝经后骨质疏松症，也会引起包括刺激性食道炎症与产生抗原反应在内的严重副作用。因此，寻求更为安全可靠的治疗绝经后骨质疏松药物是世界医药研究领域长期关注的焦点。
[0003]植物雌激素是一类具有雌激素样作用的非甾体类化合物，其生物活性约为雌激素的1/500~1/1000，作用温和，且毒副作用小，对治疗骨质疏松拥有广阔的应用前景。早期文献表明：降香黄檀（Dalbergia odorifera），又名海南黄花梨，是非甾体类植物雌激素的重要来源，同时也是名贵药材降香的基源植物。然而，降香黄檀叶，尤其是落叶，尚未得到开发利用。本课题组前期研究发现：降香黄檀叶富含黄酮类成分，其提取物具有良好的抗骨质疏松活性。本发明可为今后开发安全有效的抗骨质疏松的药品提供参考。发明内容
[0004]本发明提供降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，克服了上述现有技术的不足，解决了降香黄檀叶，尤其是降香黄檀落叶未得到开发利用的问题，提高降香黄檀叶资源的利用率，特别是降香黄檀叶提取物在制备抗骨质疏松的药品方面的应用。
[0005]本发明的技术方案之一是通过以下方式实现的：降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用。
[0006]本发明的技术方案之二是通过以下方式实现的：上述降香黄檀叶提取物的制备方法如下：将降香黄檀叶用水、乙醇或甲醇提取，得到滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物；其中，水提取：将降香黄檀叶加1至10倍量的水，在60℃至100℃温浸提取1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液；乙醇提取：将降香黄檀叶加1至10倍量的20%~90%的乙醇，在60℃至100℃温浸提取1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液；甲醇提取：将降香黄檀叶加1至10倍量的甲醇，经超声提取，提取1-3小时，得到提取液，过滤，获得滤液。[0007]本发明降香黄檀叶提取物具有良好的抗骨质疏松作用，可进一步应用于预防或治疗骨质疏松的药品，同时也解决了降香黄檀叶，尤其是降香黄檀落叶未得到开发利用的问
3
CN 111773265 A
说 明 书
2/4页
题，提高降香黄檀叶资源的利用率。
具体实施方式
[0008]本发明不受下述实施例的，可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定具体的实施方式。
[0009]下面结合实施例对本发明作进一步论述。通过下述实施例对本发明降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用进行详细说明：
实施例1
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以水为提取溶剂，按照料液比1:10比例，经100℃温浸提取，提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0010]实施例2
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以70%乙醇为提取溶剂，按照料液比1:5的比例，经80 ℃温浸提取，提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0011]实施例3
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以甲醇为提取溶剂，按照料液比1:8的比例，经超声提取，提取2小时，得到提取液，过滤出滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0012]实施例4
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以水为提取溶剂，按照料液比1:1比例，经60℃温浸提取，提取1次，每次3小时，过滤出滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0013]实施例5
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以水为提取溶剂，按照料液比1:6比例，经80℃温浸提取，提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0014]实施例6
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以20%乙醇为提取溶剂，按照料液比1:2的比例，经60 ℃温浸提取，提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0015]实施例7
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物
4
CN 111773265 A
说 明 书
3/4页
按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以90%乙醇为提取溶剂，按照料液比1:10的比例，经100 ℃温浸提取，提取1次，每次3小时，过滤出滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0016]实施例8
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以甲醇为提取溶剂，按照料液比1:3的比例，经超声提取，提取1小时，得到提取液，过滤出滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。[0017]实施例9
降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用，该降香黄檀叶提取物按下述方法得到：
将降香黄檀叶，以甲醇为提取溶剂，按照料液比1:10的比例，经超声提取，提取3小时，得到提取液，过滤出滤液，减压浓缩，得到降香黄檀叶提取物。
[0018]下面根据上述实施例的降香黄檀叶提取物在制备预防或治疗骨质疏松的药品中的应用的具体药理试验：
1、MTT法测定小鼠成骨细胞MC3T3-E1（subclone 14）细胞增殖率：（1）将培养皿中的MC3T3-E1细胞放入37℃，5% CO2培养箱进行培养。细胞培养液包括DMEM培养基、10%热灭活胎牛血清( FBS) 、100 U/mL 的青霉素和100 μg /mL的链霉素，2~3d换液1次，3~4d传代1次。[0019]（2）取MC3T3-E1细胞2×104个/孔接种于96 孔板中进行细胞增殖实验，每孔放入200μL培养液。实验组加入不同终浓度的降香黄檀叶提取物，对照组加入等体积的DMEM，每组6个复孔。继续培养24、48、72、96 h，在培养结束前4h 每孔加入5 mg /mL（0.5%） 的MTT 20 μL。培养箱继续培养4h，取出，吸弃培养液，PBS漂洗一次，每孔各加入DMSO 150 μL，Minisaker 震荡溶解10~30min 后，室温避光孵育15 min，待结晶充分溶解后，用酶标仪读取各孔在570 nm 波长下的光吸收值，计算细胞增值率。[0020]2、碱性磷酸酶（ALP）活性检测：
不同浓度的降香黄檀叶提取物作用细胞24、48、72、96 h后，弃去细胞培养液后用PBS 轻轻地冲洗2 次，用0.2%的TritonX-100裂解液100μL处理后，冰上裂解细胞30 min。将处理后的样品4 ℃、12000 ×g 离心条件下离心15 min。按ALP检测试剂盒及BCA 法分别测定ALP 值和蛋白含量，计算细胞内ALP 的活性，以U/( g·port) 表示。取上清液测定ALP活性与蛋白浓度。取蛋白上清液100 μL加入含1.0 mg·mL−1 pNPP、1mol·L−1二乙醇胺及0.5 mmol·L−1 MgCl2的缓冲液100 μL, 37 ℃避光孵育30 min, 每孔加入3 mol·L−1 NaOH 50 μL 终止反应, 在405 nm波长下测定光吸收。BCA 法测定样品蛋白浓度，用于校正ALP活性。[0021]通过对降香黄檀叶提取物开展促进骨形成活性研究，如表1所示，结果表明：与对照组比较，降香黄檀叶提取物在不同给药浓度下，可显著提高OD值；与对照组比较，降香黄檀叶提取物在10-6、10-7及10-8给药浓度下，可显著提高ALP活性。由此可见，该降香黄檀叶提取物具有较强的促进骨形成活性。
[0022]
表1 降香黄檀叶提取物对成骨细胞活性
5
CN 111773265 A
说 明 书
4/4页
注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。[0023]以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此本发明的实施方式及保护范围，对 于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书所作出的等同替换和显而易 见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。
6