T-SPOT.TB与sPD-L1检测对结核性胸腔积液的诊断价值

T-SPOT. TB与sPD-Ll检测对结核性胸腔积液的诊断价值

陈志海1

【摘要】目的探讨结核感染

许红阳2

T细胞斑点试验（T-SPOT.TB)、可溶性程序性死亡配体1( soluble pro­grammed death ligand-1 ， sPD-Ll) 单独及联合检测在结核性胸腔积液诊断中的应用价值。方法 我院于2016 年1月至2018年1月期间收治的140例结核性胸腔积液患者为结核组，选择同时期收治的140例非结核性 胸腔积液患者为非结核组，取血进行[SPOT. TB，取胸腔积液测定5D-L1水平，分析T-SPOT. TB、SPD-L1单 独或联合诊断结核性胸腔积液的诊断效能。结果结核组T-SPOT. TB阳性率为87. 1%，非结核组阳性率为 9. 3%，结核组阳性率显著高于非结核组（（=169. 945，！ <0. 001);结核组胸腔积液5D-L1水平显著高于非 结核组，差异显著（> =21. 345，！ <0. 001);单独的T-SPOT. TB、SPD-L1诊断结核性胸腔积液，敏感度、特异度 差异无统计学意义(！>0. 05);平行联合检测的敏感度显著高于系列联合检测（！< 0. 05)，且显著高于各单项 检测（！ <0. 05);系列联合检测的特异度显著高于平行联合检测（！ < 0. 05)，且显著高于各单项检测（！ < 0.05)。结论T-SPOT.TB、5D-L1联合检测可提高结核性胸腔积液诊断的灵敏度与特异度，对疾病的早期

诊断具有重要价值。

【关键词】结核感染

T细胞斑点试验(可溶性程序性死亡配体1;结核性胸腔积液

.

-

Diagnostic value of TSPOTTB and sPDLl detection for tuberculous pleural effusion CHEN Zhi-hai，XU Hong-yang Department of Respiratory，Wuxi Ninth Peoples Hospital，Wuxi，Jiangsu 214023，China

【Abstract】 Objective To explore the clinical value of T-!SPOT. TB and sPD-L1 in the diagnosis of tubercu­lous pleural effusion. Methods 140 tuberculous pleural effusion patients admitted from January 2016 to January2018 were chosen as the TBgroup and 140 patients with non-tuberculous pleural effusion periods were chosen as the non-HCA group. The results of T-!SPOT. TB and sPD-L1 test were measured，and the val­ue of T-!SPOT. TB and sPD-L1 in the diagnosis of tuberculous pleural effusion were rate of T-SPOT. TB in the TB group was 87. 1 %，and the positive rate in the non-TB group was 9. 3% ( 2 = 169. 945，P < 0. 001). The level of sPD-L1 in the TB group was significantly higher than in the non-TB group (t = 21. 345，P <0. 001). There was no statistically significant differencc between the two groups in sensitivity and speci­ficity ( P > 0. 05 ). The sensitivity of parallel combined testing was significantly higher than that of serial combined testing and each single test ( P < 0. 05 ). The specificity of series combined testing was significantly higher than that of parallel combined testing and each single test ( P < 0. 05 ) . Conclusion T-!SPOT. TB bined testing can improve the sensitivity of diagnosis of tuberculous pleural effusion，and seriaimprove the specificity，which is of great value for the early diagnosis of tuberculous

【Key words】 T-SPOT. TB; soluble programmed death ligand-1 ; tuberculous pleural effusion

-

结核性胸腔积液是一种常见的肺外结核，临床

doi： 10. 3969/j. issn. 1009 - 6663.2019. 06.023

基金项目：无锡市医院管理中心医学科技发展基金（作者单位

上渗出性胸腔积液的病因以结核、感染和恶性肿瘤

No YGM1003)

最为常见，由于不同病因胸腔积液的治疗和预后差 异极大，故胸腔积液的鉴别诊断具有重要意义。结 核性胸腔积液的诊断主要依据临床表现、病史、胸水

:1.214000江苏无锡，无锡市第九人民医院呼吸科2.214023江苏无锡，南京医科大学附属无锡人民医院，

ICU

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[收稿日期：2018 - 11 - 15 ]

.

1054临床肺科杂志2019年6月第24卷第6期

规实验室检查、影像学检查结果等排除结核;④所有

者均知

同

。

常规检查及影像学检查，但准确率不理想，易发生误 诊或漏诊[1 _2]。胸水结核分枝杆菌（M. tuberculosis，

MTB)涂

片及培养是诊断结核性胸腔积液的主要依

排除标准:①合并人类免疫缺陷病毒感染;②合 并急性病毒感染;③合并自身免疫系统疾病;④合并 活动性肺结核;⑤合并严重肝肾心脑血管疾病;⑥有 免疫抑制剂用药史。

二、 方法1

据，但培养耗时长，且漏诊率高，而胸膜活检为诊断 结核性胸腔积液的“金标准”，但属于有创性检查， 风险较高且价格不菲，难以全面开展。试验（T-SPOT. T

T

细胞斑点

B)

是诊断结核病的常用细胞学检

查技术，可以检测效

Z T

细胞在

MTB抗

原刺激下分

T-SPOT. TB 测定

h

内使用

泌的干扰素，具有较高的灵敏度与特异度的检 两组均于入院时取肘静脉血，于2

T-

测[3*。程序性死亡配体 1 (program

med death ligand-

1，PD-L1)是一种协同刺激信号分子，主要表达于激 活的

TB

及单核细胞，近年来研究显示，可溶性

PD-

I

参与并介导了机体的免疫调节并在

MTB感

染后 减弱免疫应答，促进病毒感染的继续发展，有助于结 核性胸腔积液的诊断[4]。本研究采用T-SPOT. TB、 5

D-L1

单独或联合检测结核性胸腔积液，探讨其诊 价

。

资料与方法

一'、基本资料

选取我院于2016年1月至2018年1月期间收 治的140例结核性胸腔积液患者为结核组，所有患 者均经病理学检查确诊，在明确诊断前均未经抗结 核药物治疗。其中男78例，女62例，年龄28 -63 岁，平均(46. 42 ± 5. 81)岁。选择同时期收治的140 例非结核性胸腔积液患者为非结核组，所有患者均 经病理检查证实，其中男82例、女58例，年龄26 - 61岁，平均（45. 81 ±5. 95)岁；胸膜转移癌111例， 原发性胸膜恶性病变15例，肺炎合并胸腔积液11 例，心力衰竭并胸腔积液3例。两组患者基本资料 差异无统计学意义（！> 0.05)，具有可比性。本研 究已通过我院伦理委员会审批。

结核组纳入标准:①符合中华医学会结核病学 分会《肺结核诊断和治疗指南》[5]中的诊断标准;② 所有患者均经病理学检查确诊或经抗结核治疗有 效;③有咳嗽、盗汗、发热、消瘦等临床症状;④所有 患者在明确诊断前均未经抗结核药物治疗;⑤所有 患者均知情同意。

非结核组纳入标准:①胸腔积液为渗出液;②胸 腔积液经病理学检查确诊为恶性肿瘤或其他疾病; ③痰涂片及

MTB培

养阴性，根据临床症状、病史、常

SPOT. TB试

剂盒（由英国牛津免疫公司提供）进行

检测。3000rpm离心20m

in，取

血清，采集外周血单

核细胞，制成细胞浓度为3 X 106/mL

的细胞悬液。

在96孔板上设置4个检测孔，分别以细胞培养液作 为阴性对照，ESAT-6为抗原

A，CFP-10作

为抗原

B，

植物血凝素为阳性对照，每个孔加人0. 1 mL细胞悬

液。经37 °C、5%

C〇2孵育过夜、P

BS洗涤后，加入 现配的酶标抗体工作液50

'L

，37

°C、5

%

C

〇孵

育、洗涤后加入显色液，孵育约7 min

后蒸馏水冲洗

终止反应，干燥。采用

ELISPOT自

动计数仪计数检

测孔中的斑点。根据试剂盒说明书判断结果:在阳 性对照孔斑点数>20个的前提下，阴性对照孔斑点 数为'5个时，抗原

A

或抗原

B

斑点数！阴性对照

孔斑点数+ 5;阴性对照孔斑点数>5个但'10个 时，抗原A

或抗原

B

斑点数在阴性对照孔的2倍以 上；

为

。

2

5

D-L1

测定

患者接受治疗前胸穿抽取胸腔积液50

mL，

2000rp

m离心10m

in，取

上清，用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定5D-L1，试

剂盒由上海润裕生物科技

有限公司提供，参照说明书进行检测。

3

研究方案首先比较两组患者血清

T-

SPOT. TB、胸

腔积液5

D-L1

检测结果差异，然后采 用5

D-L1

联合

T-SPOT. TB

诊断结核性胸腔积液。

两种检测中，任何一个结果为阳性，即判定为平行联 合检测阳性;两种检测结果均为阳性时，判定为系列

检测

。

三、 统计学处理本研究的数据由spss19. 0

进行分析，计数资料

采用

x2检验比较，计量资料以（J ±B

进行正态分布

检验，《检验比较正态分布的计量资料，统计结果以 ! <0. 05视为具有统计学差异。

临床肺科杂志2019年6月第24卷第6期

单独的[液，

一、两组患者[

测结果比较

结核组[

1055

诊断结核性胸腔积

（！>0.05)。

结 果

腔积液5

SPOT. TB、SPD-L1

、特异度差异无统计学 2) 。

SPOT. TB、胸D-L1

检(

SPOT. TB阳性率为87. 1K，非结核组

率显著高于

核组

表2单项检测诊断结核性胸腔积液诊断效能分析敏感度

异127/140(90.7)129/140(92.1)

0.182测

122\"135(90.4)116/127(91.3)

0.074测

127\"145(87.6)129/153(84.3)

0.658率为9. 3%，结核组

((=169. 945，！ < 0. 001 )。结核组胸腔积液 5

D-

L1

T-SP0T.TBsPD-Ll

(诊方法

122/140(87.1)116/140(82.9)

1.008水平显著高于非结核组，差异显著（> =21. 345，！

<0.001)。（见表 1)。

表1两组患者T-SPOT. TB、胸腔积液1

D-L1检测结果比较组

/T-SPOT. TB

阳性阴性sPD-L1( n'mL)

结核组

140122184.19±1.07核组

140

13

127

1.95±0.63(169.94521.345<0•001

<0.001

二、SPD- L1单独检测诊断结核性胸腔积液的

UOC曲线分析

5

D-L1

单独检测诊断结核性胸腔积液的

R0C

曲线（见图1)，曲线下面积为0. 8(95%CI:0. 822

-0. 906)，以3. 58 ng/mL作

为

cut-off值

时诊断的特

异

最高。

三、单项检测诊断结核性胸腔积液诊断效能分

析

0.315

0.669

0.786

0.417

四、联合检测诊断结核性胸腔积液诊断效能比

较

平行联合检测的 显著高于系列联合检测

(! < 0. 05 )，

显著高于各单项检测（！ < 0. 05);系

列联合检测的特异度显著高于平行 检测（！ <

0.05)，显著高于各单项检测（！ <0.05)。（

，表

3)。

表3联合检测诊断结核性胸腔积液诊断效能比较诊 方法敏感度

异

测

测

平行检测132/140(94.3)117/140(83.6)132/155(85.2)117/125(93.6)系列检测

108/140(77.1)137/140(97.8)108/111(97.3)137/169(81.1)

16.80016.95910.8029.605<0.001

<0.001

<0.001

0.002

讨 论

结核性胸腔积液是临床常见疾病，由于患者临 床

缺乏特异性，其早期诊断较为困难。“金标”

活检具有

，创较大且价格不菲，不

利于结核

腔积液的早期诊断。近年来，特

异

、

较高

有效的

核

腔

液诊

研究已成为研究热点[6_8]。T

淋巴细胞介导的细胞 免疫是机体抗

MTB的

主要

[9]。

MTB在

入侵机巨

胞吞噬、分解，

异

抗

原

ES-

AT-6、CFP-10递

呈给

T

淋巴细胞，从而使

T

细胞成 为记忆

T

淋巴细胞。当机体再

MTB时

，记忆T

细胞会

增殖为特异的效应

T

细胞

核特

异性抗原的刺激下 大量3-干扰素，执行对抗

MTB的

免疫反应。

T-SP0T.TB是近年发展起来的检测结核特异

的效应

T

淋巴细胞水平的检测技术。该方法

：

核特异性抗原（ESAT9、CFP-10)作为刺激抗原，刺

1056

激外周血中的效应

临床肺科杂志2019年6月第24卷第6期

T

细胞，促使其分泌7-干扰素，

[2]

通过酶联免疫斑点技术进行检测，间接测定活化的 特异性

T

细胞，以对结核患者进行诊断[10]。

TT

淋巴 淋巴

[3]

细胞的激活和增殖除了需要特异性抗原与

细胞特异性受体结合提供的第一信号外，还需要多 种协同刺激分子提供第二信号，以精准调节免疫应 答。

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PD-L1

T、BT

是一种协同刺激信号分子，主要表达于 淋巴细胞、单核细胞及某些肿瘤细胞，

[4]

活化的可以和

细胞表面程序性死亡受体1相结合，发挥

YINW，TONG ZH，CUI A，et al PD-1/PD-Ls pathways between CD4 r T cells and pleural mesothelial cells in human tuberculous 负性免疫调节的作用[11]。研究表明[12]PD-L1在多 种疾病的免疫应答过程中具有抑制T

淋巴细胞活

化、减弱效应性

T

淋巴细胞功能、减少细胞因子的

分泌的作用，有助于保持免疫自稳、避免过度免疫损 伤。

MTB感

染机体时，7-干扰素表达提高，通过干

扰素调节因子刺激5

D-L1

的表达，产生负性

T

细胞免疫的作用，可见

sPD-L1

通过免疫调节参与结

核性胸腔积液的发生、发展[13-14]。有研究发现[15]， 胸腔积液高表达5

D-L1

有助于结核性胸腔积液的

诊

。

本研究结果显示，结核组

T-SPOT. TB

阳性率、

胸腔积液5

D-L1

水平显著高于非结核组，表明由于

MTB感

染，患者血清7-干扰素、胸腔积液5

D-L1

逐

渐升高，表明

T-SPOT. TB、SPD-L1

可在一定程度上

预测结核性胸腔积液。而采用单独的T-SPOT. TB、

5

D-L1

诊断时，两者诊断效能无明显差异，且诊断

敏感度均低于90K，无明显优势，这是由于T-

SPOT. TB

和5

D-L1分别代表了 T细胞免疫的

两个方向，而联合诊断可以把同时观察到免疫应答 的双重信号，改善诊断的敏感度和特异度。本 研究中，平行联合检测的敏感度、系列联合检测的特 异度显著高于各单项检测，表明将双重信号结 合起来，诊断的敏感度和特异度大幅提高，有助于减 少结核性胸腔积液的误诊漏诊。

总之，T-SPOT. T

B、SPD-L1

联合检测可提高结

核性胸腔积液诊断的灵敏度与特异度，对疾病的早 期诊断具有重要价值。

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[收稿日期:2018-12-14]