超滤法纯化三七总皂苷的工艺研究

昆明医学院学报２０１０。（６）：７～１０　ＣＮ　５３—１０４９／Ｒ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　超滤法纯化三七总皂苷的工艺研究　陈彤”，甘献文２），张要武　，肖娜力，吴廷丽力，赵松月　）　（１）昆明医学院药学院，云南昆明　６５００３１；２）云南云科药业有限公司，云南昆明　６５００３３）　［摘要］目的探究超滤分离技术纯化三七总皂苷．方法三七经大孑Ｌ树脂纯化，氧化铝、活性碳精制，　在浓缩干燥前增加超滤工艺，并对超滤液的可见异物、有效成分含量、截流率、膜通量测定．结果截留相对分子量１００　ＫＤ的聚醚砜膜作为中试超滤膜较适合．结论减少超滤液中的可见异物数量，提高澄明度．　选用卷式　所选择的膜分离技术纯化三七总皂苷，可　［关键词］三七；三七总皂苷；超滤；聚砜膜　［中图分类号］Ｒ２８４．２［文献标识码］Ａ［文章编号］１００３—４７０６（２０１０）０６—０００７—０４　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｏｆ　Ｐａｎａｘ　Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ｂｙ　Ｕｌｔｒａ－　ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｃ　ＣＨＥＮ　Ｔｏｎｇ”，ＧＡＮ　Ｘｉａｎ—ｗｅｎ　，ＺＨＡＮＧ　Ｙａｏ—ＷＵ　２），ＸＩＡＯ　Ｎａ　２），ＷＵ　Ｔｉｎｇ—ｌｉ　２］，ＺＨＡＯ　Ｓｏｎｇ—ｙｕｅ　）　（１）Ｆａｃｕｌｔｙ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｙｕｎｎａｎ　６５００３１；２）　Ｙｕｎｎａｎ　Ｙｕｎｋｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｙｕｎｎａｎ　６５００３３，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｐｕｒｉｆｙ　ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｏｆ　Ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ｂｙ　ｕｈｒａｆｉｈｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｒｈｉ—　ｚｏｍｅ　Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ｗａｓ　ｐｕｒｉｉｅｄ　ｂｙ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ，ａｌｕｍｉｆｎａ，ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ．Ｔｈｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｗａｓ　ｕｈｒａｆｉｈｒａｔ—　ｅｄ　ｂｅｆｏｒｅ　ｄｒｙｉｎｇ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｖｉｓｉｂｌｅ　ｆｒｅｍｄｅ　ｓｔｏｆｆｅ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ　Ｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｕｈｒａｆｉｌｔｒａｔｅ，ｔｈｅ　ｃｌｏｓｕｒｅ　ｒａｔｅ．ａｎｄ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｆｌｕｘ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ　Ｏｐｔｉｏｎａｌ　ｒｏｌｌ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　１００　ＫＤ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｓｕｌｆｏｎｅ　ｕｌｔｒａ　ｉｆｌｔｒａｔｉｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　ｗａｓ　ａｎ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｐｉｌｏｔ　ｐｌａｎｔ　ｔｅｓｔ　ｕｌｔｒａ　ｉｆｌｔｒａｔｉｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕ－　ｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｃｈｏｉｃｅ　ｏｆ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｏｆ　Ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ｃａｎ　ｒｅ—。　ｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｖｉｓｉｂｌｅ　ｆｒｅｍｄｅ　ｓｔｏｆｆｅ，ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｃｌａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｅ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ；Ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｏｆ　Ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ；Ｕｌｔｒａｆｉｈｒａｔｉｏｎ；　Ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｓｕｌｆｏｎｅ　ｕｌｔｒａ　ｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　ｆ三七［Ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ］　治为：活血祛瘀，通脉活络，用于中风偏瘫，瘀　血阻络证；动脉粥状硬化性血栓性脑梗塞，脑栓　塞，视网膜静脉阻塞见淤血阻络证者．由于　疗效确切，已成为我国城市医院药物排行榜上领　先的大类品种，但在制备过程中，常因各种原因　而难以控制澄明度，特别是在配制和灌封后经检　为五加科人参属草本植物．三七总皂苷（ｔｏｔａｌ　ｓａＤｏｎｉｎｓ　ｏｆＰａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ，ＰＮＳ）为三七的提取　物，是三七主要生理活性成分，用ＰＮＳ为原料制　备的中药注射剂有血塞通注射液、血栓通注射液　以及注射用血塞通、血栓通冻干粉针，其功能主　［基金项目］国家科技支撑计划“三七提取物（注射用）生产技术研究”基金资助项目（２００６ＢＡＩＯ６Ａ１４－１　１）　［作者简介］陈彤（１９６９～），女，河南宝丰县人，Ｎ￣ｌｇ￣，副教授，主要从事新型给药系统及中药提取分离技术　研究工作．　８　昆明医学院学报　第３１卷　查，澄明度是合格的，但在灭菌或贮存过程中却　出现了浑浊甚至沉淀，其主要原因可能是ＰＮＳ　原料中杂质未除尽［１，２１．一般杂质分子量较大　（在５０　０００以上ｐ】），除去这些杂质可达到提高澄　明度的目的．目前已有采用超滤技术去除杂质，　Ｉ．ｚｍ板框过滤器滤过，取１　０００　ｍＬ滤液超滤，分　别测定超滤前原液、超滤液和截流液中有效成分　三七皂苷Ｒ１（Ｒ１），人参皂苷Ｒｇｌ（Ｒｇ１）和人参　皂苷Ｒｂｌ（Ｒｂ１）的含量、可见异物、测定截流　率、膜通量．　提高中药注射剂的澄明度研究　．本试验在大孔　树脂纯化提取液的基础上，增加浓缩干燥前药液　１．３．２　中试提取超滤工艺三七经醇提，大孑Ｌ树　脂纯化，氧化铝、活性碳精制，用０．４５　ｍ板框　的超滤工艺并进行考察，为以ＰＮＳ为原料的注射　液的进一步开发提供实验依据．　１材料与方法　１．１仪器　小试进口超滤设备：美国科氏滤膜系统公司　超滤装置，中空纤维超滤膜，膜面积０．２　Ｉｌｌ×０．２　ｉｎ，截留分子量分别为５０　ＫＤ，１００　ＫＤ和１　０００　ＫＤ，聚砜膜；小试国产超滤设备：天津膜天膜工　程技术有限公司超滤装置，泵：Ａ型，ＴＰ１０—２０　蠕动泵，流量：０～２００　Ｌ／ｈ，最大压力：０．１　ＭＰａ，　管路：　１０ｘ　７ＩＴｌｍ医用硅胶管，压力表：隔膜压　力表，截留分子量分别为２０～５０　ＫＤ，６０—８０　ＫＤ，０．１　ｍ，聚砜膜；中试超滤设备：南京凯米　科技有限公司组装，采用美国科氏滤膜系统公司　超滤膜，卷式聚砜超滤膜（膜面积５　ＩＴＩ×５　ｍ，截　留分子量：３０　ＫＤ，１００　ＫＤ，０．１　ｍ），中空聚砜　纤维膜（膜面积２　Ｉｎ×２　ｍ，截留分子量：３０　ＫＤ）；２０１０ＡＨＴ高效液相色谱仪（日本岛津）；　ＣＰ２２５Ｄ电子天平（北京塞多利斯仪器有限公　司）；ＰＨＳ一２５型ＰＨ计（上海雷磁仪器厂）；　ＤＨＧ一９０７６Ａ型电热鼓风干燥箱（上海精宏实验设　备有限公司）．　１．２试药　色谱纯甲醇（美国默克公司）；色谱纯乙腈　（美国默克公司）；三七皂苷Ｒｌ对照品（中国药　品生物制品检定所，编号１　１０７４５—２００４１５），人参　皂苷Ｒｇｌ对照品（中国药品生物制品检定所，编　号１０７０３—２００４２４），人参皂苷Ｒｂｌ对照品（中国　药品生物制品检定所，编号１１０７０４—２００３１８）；　ＰＮＳ（云南云科药业有限公司生产，批号　２００６１２０３００，２００７０１　１８００，２００７０４０１００）．　１．３方法　１．３．１小试超滤实验方法小试超滤实验分别选　用了进口超滤设备和国产超滤设备．三七经醇提，　大孔树脂纯化，氧化铝、活性碳精制，用０．４５　过滤器滤过，取８０　Ｌ滤液超滤，分别测定超滤前　原液、超滤液和截流液中有效成分三七皂苷Ｒｌ　（Ｒ１），人参皂苷Ｒｇｌ（Ｒｇ１）和人参皂苷Ｒｂｌ　（Ｒｂ１）的含量、可见异物、测定截流率、膜通　量．　２结果　２．１小试超滤实验结果　小试进口超滤设备超滤结果见表１；小试国　产超滤设备超滤结果见表２．用小试进口超滤设　备和国产超滤设备进行超滤：可减少超滤液中的　可见异物数量，提高药液的澄明度．从超滤液中　三种有效成分的含量，超滤液可见异物检查，截　流率以及膜通量的测定结果看出，小试进口超滤　设备选用截留相对分子质量１００　ＫＤ的膜较合适；　小试国产超滤设备选用截留相对分子质量６Ｏ～８０　ＫＤ的膜较合适．　２．２中试超滤实验结果　中试超滤实验结果见表３．用中试国产超滤　设备进行超滤：可减少超滤液中的可见异物数量，　提高药液的澄明度．从超滤液中三种有效成分的　含量，超滤液可见异物检查，截流率以及膜通量　的测定结果中看出，中试国产超滤设备选用卷式　截留相对分子量１００　ＫＤ的膜较合适．　３讨论　３．１有效成分分子量及极性对于截流率的影响　三七皂苷Ｒｌ的分子量为９３２，人参皂苷Ｒｇｌ　的分子量为８００，人参皂苷Ｒｂｌ的分子量为　１　１０８，极性大小为三七皂苷Ｒ１＞人参皂苷Ｒｇｌ＞　人参皂苷Ｒｂ１．在小试超滤实验中发现且随着超　滤膜截流分子量的降低，超滤液中Ｒｂｌ的截流提　高．考虑应与Ｒｂｌ极性较小，可能与超滤膜有一　定的吸附作用有关．　第６期　陈彤，等．超滤法纯化三七总皂苷的工艺研究　表１小试进口超滤设备超滤结果　＝３）　９　Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｓｍａｌｌ　ｓｃａｌｅ　ｉｍｐｏｒｔ　ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　＝３）　表２小试国产超滤设备超滤结果　＝３）　Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆｓｍａｌｌ　ｓｃａｌｅ　ｕｌｔｒａｆｄｔｒａｔｉｏｎ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ（ｎ＝３）　３．２小试超滤液中各有效成分的含量与原液不一　致　致．但中试超滤实验中由于残留液较少，超滤液　由于小试超滤实验中有较多的残留液未能滤　中各有效成分的含量与原液基本一致．　３．３预处理效果好，会减少超滤膜的污染程度　膜的孔隙常因杂质过多被阻塞而影响滤速．　过，造成超滤液中各有效成分的含量与原液不一　１０　昆明医学院学报　第３１卷　表３中试超滤实验结果（ｎ＝３）　Ｔａｂ。３　Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｍｅｄｉｕｍ—ｓｉｚｅｄ　ｌｕｔｒａｔ＇ａｌｔｒａｔｉｏｎ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ（ｎ　３）　中药材成分复杂含杂质较多，带入药液中的杂质　其质量控制［Ｊ］．　重庆工学院学报（自然科学），　需要预先处理除去，否则大量杂质阻塞膜孔，影　２００９．２３（７）：４５—４７．　响超滤．预处理效果好，会减少超滤膜的污染程　［５］杨华生，吴璐，熊飞艳，等．脉络宁冻干粉针超滤工艺　度，提高系统的生产能力，减少系统的冲洗次数，　研究［Ｊ］．中成药，２００８，３０（２）：２６６—２６７．　并能延长膜的寿命．本实验在大孔树脂纯化，氧　［６］尹楠，郑云枫，彭国平．基于超滤技术的血塞通注射　化铝、活性碳精制的基础上，进而对浓缩干燥前　液的工艺优化［Ｊ］．　天然产物研究与开发，２００９，２１　（１）：１５９—１６２．　药液进行超滤．　［７］郭丽霞．　中空纤维超滤膜制备利巴韦林注射液及质　量考察［Ｊ］．中国药师，２００７，１０（５）：４５７—４５８．　［参考文献】　［８］萧伟，戴翔翎，凌娅，等．不同评价指标优选热毒宁注　射液中间体的精制工艺［Ｊ］．天然产物研究与开发，　岳大彪，代喜国．中药注射剂中不溶性微粒所致临床　２００７。５（１）：４２—４４．　不良反应的研究［Ｊ］．　黑龙江中医药，２００７，３６（６）：　［９］立中，涂德云．采用超滤技术制备伸筋草注射液的中　５３—５５．　试生产研究［Ｊ］．中成药，２００２，２４（２）：１３７—１３９．　［２］　姜姗，倪健．中药注射液不溶性微粒的研究现状与再　［１０］袁小红，胡学军．超滤法在益气回阳注射液制备工艺　认识［Ｊ］．中国药师，２００９，１２（１０）：１４６５—１４６８．　中的应用［Ｊ］．　中国实验方剂学杂志，２００１，７（４）：　［３］　庄越，曹宝成，萧瑞样主编．实用药物制剂技术［Ｍ］．　１３—１５．　北京：人民卫生出版社，１９９８：４０２—４４１．　（２０１０—０３—２０收稿）　［４］　姜海蓉，彭方毅，邱荣蓉，等．感冒康注射液的制备及