中国兽医寄生虫病 ２００８年７月 １ 疫苗类型 １．１ 强毒活疫苗 强毒活疫苗是采用自然分离的 成三价早熟弱毒苗 。法国Ｐ．Ｃｏｕｄｅｒｔ（１９９６）在 实验室选育出了兔艾美耳球虫的早熟株，这些早熟 株与野外株在形态上有区别。但是关于兔球虫的早 熟株选育研究较少，我国国内还未见相关报道 ］。 强毒虫株制取的疫苗。目前已有商品化生产，其优 点是免疫力较强。Ｄａｎｆｏｒｔｈ（１９８８）、Ｌｅｅ等（１９９６）报 早熟株的一个特点是潜隐期缩短，并且致病力下降， 道，在较好的饲养条件下，强毒苗Ｃｏｃｃｉ—ｖａｃ和Ｉｍ— ｍｕｅｏｘ都会对种鸡、后备蛋鸡和肉鸡、仔鸡提供较强 的免疫保护力 ＇ 。国内也有相关报道，韩谦 （１９９４）。。 报道中国农业大学寄生虫教研组推出的 原因是第二代裂殖生殖缺乏或发育缺陷，已选育出 的Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅ．ｂｒｕｎｅｔｔｉ和Ｅ．ｐｒａｅｃｏｘ的早熟株均 为缺少第二代裂殖生殖，而Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ早熟株为第二 代裂殖生殖不完全。最后一代裂殖期发育快且内含 球虫活苗试验产品接种成功，肉仔鸡应用后无明显 的不良反应，免疫后６周能抵抗２０万混合孢子化卵 囊的攻击。 但强毒虫苗也有一定的缺点：第一，存在于虫苗 中的各种球虫株都是完全致病性的，而且毒力较强， 容易引发球虫病；第二，球虫卵囊在水中沉降较快， 易造成免疫不均匀，使得个体动物摄入的卵囊量不 一致，必须寻找较好的悬浮剂搭配使用；第三，可能 将强毒球虫引入新的养殖场。家兔球虫病分布广 泛，斯氏艾美耳球虫等生活史较为特殊，国内外对于 兔的强毒虫苗尚未见相关报道。目前，弱毒活疫苗 也加强了开发与应用。 １．２弱毒活疫苗弱毒活疫苗是通过一定途径致 弱球虫，得到弱毒虫株来制取的疫苗。与强毒疫苗 相比，这一类疫苗的致病性较小，具有抗球虫的高效 力和安全性。目前也有的已经被开发为商品虫苗， 如使用早熟选育致弱的球虫疫苗Ｐａｒａｅｏｘ（含有柔 嫩、巨型、堆型艾美耳球虫等７种早熟株）和Ｌｉｖａｃｏｘ （含有堆型和巨型艾美耳球虫的早熟株）等 Ｊ。由 于致弱途径的不同，弱毒活疫苗的特点和免疫力有 一定差异。 鸡胚传代致弱疫苗的免疫力较稳定，樊生超等 （１９９６）将柔嫩艾美耳球虫鸡胚适应株连续回鸡６ 代仍无返祖现象 ］。但也有其局限性，首先，鸡胚 传代致弱方法只能用于鸡球虫疫苗的研制，也并非 所有的球虫都可以进行鸡胚传代。在常见的９种鸡 球虫中，只有柔嫩艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、和 缓艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫等４种能在鸡胚内 完成其内生性发育，其余５种不能在鸡胚内完成内 生性发育。而且鸡胚适应致弱株在回归鸡体连续传 代一定代数后，也可能有致病性恢复的现象 。 早熟选育疫苗在遗传上具有稳定性，对于商品 运用具有实际意义。目前这类疫苗已成功获得了８ 种球虫的早熟虫株，国内已经有学者分别选育成功 Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ、Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅ．ｍａｘｉｍａ的早熟株，并已制 较亲本株少的裂殖子，比亲本毒株提前进入配子生 殖，减轻了对宿主的损伤。Ｓｈｉｒｌｅｙ（１９９４）报道，Ｅ． ｍａｘｉｍａ强毒株的１００个卵囊可使３ ｘ １０ 以上个肠 上皮细胞受破坏，而同样剂量的早熟株仅破坏７ ｘ ｌ０ 个肠上皮细胞。相关的试验结果也证实，早熟 株比亲本毒株的致病力降低许多，用于疫苗株是安 全的 。但早熟株的选育要经过反复传代才能使 球虫的内生发育周期缩短，过程比较繁琐，对于大规 模生产应用也具有一定缺陷。 用理化致弱方法研制的球虫弱毒疫苗也有较强 的免疫力，具有安全稳定、成本较低的优点，但起步 较晚，目前商品开发应用还较少。中国农业科学院 上海兽医研究所采用双重致弱法研制出了ＤＬＶ鸡 球虫疫苗＂ 。这类疫苗的缺点在于免疫力不如强 毒苗，而且可能破坏球虫卵囊的生长发育，如吴兆敏 等（１９９１）¨刮报道了化学诱变剂ＮＴＧ处理后的柔嫩 艾美耳球虫免疫雏鸡后可诱导保护性免疫，但球虫 毒力下降的同时，卵囊的繁殖力也在下降。 上述强毒疫苗和致弱疫苗都不同程度的存在着 以下缺点：制作过程繁杂；疫苗需要低温贮藏；致弱 虫株存在着潜在毒力返强或进化为更强虫株的可能 性；疫苗接种不当可能导致鸡群发病甚至死亡。 １．３基因工程苗基因工程疫苗是应用分子生物 学技术研制的疫苗，球虫的基因工程苗主要是ＤＮＡ 重组疫苗。与强毒和弱毒疫苗相比，基因工程疫苗 具有贮藏方便、安全性高的优点，因此成为疫苗研制 的一种新方向 Ｊ。 目前国内外的研究者已经克隆出许多鸡球虫基 因，并已证实一些基因表达的蛋白具有部分的保护 性。保护性的大小与基因的重要性有直接关系，也 与鸡的基因背景和抗原递呈方式有很大关系 。 Ｌｉｌｌｅｈｏｊ（１９８８）应用重组蛋白免疫鸡，发现不同品系 的鸡表现出不同的免疫效果 …。 但由于球虫基因组庞大，生活史复杂，需经几个 不同的发育阶段，不同发育阶段的虫体其形态、结构 维普资讯 http://www.cqvip.com 第ｌ６卷第４期 张正黎等：球虫疫苗研究进展 及组成都有很大差异，其基因在不同发育阶段的表 达情况也不一致，鉴定保护性抗原有一定难度，给基 因工程疫苗的研究带来了一定困难。球虫的保护性 抗原可能是由各阶段虫体所具有的保护性抗原共同 组成，因而克隆出的单一重组抗原只具有部分保护 性 。国外有学者认为用重组抗原接种鸡只产生 部分抗球虫保护力，迄今为止所获得的保护水平不 能认为足以有效地控制野外毒株球虫病 ’ 。基因 工程苗目前还处于研究探索中，尚未达到成功和完 良好免疫原性，其原理可能是由于第二代裂殖体从 原来的粘膜固有层转而全部寄生在肠腺上皮细胞 后，不引起出血，从而对组织的损伤减小。 张勤等（１９８０）和杨振中等（１９８１）先后报道了 对柔嫩艾美耳球虫鸡胚传代致弱的培育，和柔嫩艾 美耳球虫鸡胚致弱虫苗的安全性、保存期和免疫期 以及弱毒虫苗的田间免疫观察。柔嫩艾美耳球虫在 鸡胚内培养成功证明了在鸡胚中连续传代能导致适 应虫株的产生，而且减弱了对雏鸡的致病力。经过 全有效的程度，仅停留于实验室阶段。 １．４灭活疫苗直到今天的研究表明，宿主对球虫 的保护性免疫是由活的球虫感染所引起的，用灭活 的虫体免疫几乎未获成功，灭活疫苗的成功研制国 内外尚无报道，其原因很可能是导致宿主产生保护 性免疫的抗原仅存在于有代谢活性的虫体的缘故 （Ｒｏｓｅ１９８２）［７９］。 ２疫苗的研制方法 ２．１强毒活疫苗球虫强毒活疫苗主要采用直接 从自然发病的畜禽体内或者粪便中收集球虫混合卵 囊，然后采用单卵囊分离法纯化球虫，并按照一定比 例混合，配以适当的稳定剂制成疫苗的方法 ］。 Ｅｄｇａｒ（１９５２） 给鸡接种含有８种鸡球虫的混 合孢子化卵囊，使鸡群通过反复感染不断增强免疫 力的方法研制了Ｃｏｃｃｉ．ｖａｃ虫苗。强毒疫苗的研制 多参考这一方法，由于虫苗虫株对药物敏感，通常使 用药物对其繁殖量加以控制，使鸡只在低剂量球虫 感染的情况下，逐步建立坚强免疫力，以抵抗现场强 毒虫株的侵袭 Ｊ。 有研究表明，强毒疫苗的免疫效果取决于接种 孢子化卵囊的数量和接种方式。近年来国内外报道 均认为低剂量多次免疫是比较优越的一种免疫方 式，重复感染卵囊所引起的免疫水平，要比一次性感 染相同数量的卵囊所引起的高得多 。‘ 。 ２．２弱毒活疫苗球虫的弱毒活疫苗是采用一定 途径致弱球虫卵囊，获得弱毒虫株制成疫苗的方法。 主要的致弱途径有鸡胚传代、早熟选育、理化手段 等。 ２．２．１ 鸡胚传代致弱 这种方法是令球虫卵囊在 体外人工脱囊，获得子孢子，并接种到发育中的鸡胚 内，使其繁殖后代卵囊、待这些卵囊抱子化后，重复 上述操作，如此多次经鸡胚传代后，球虫适应在鸡胚 内生长，形成所谓“鸡胚适应株”。这种鸡胚适应株 再回到鸡体时，致病力已大大降低了，而且仍然保持 连续培养传代，柔嫩艾美耳球虫ＴＡ株致病性显著 低于亲本株，而且能保护强毒的感染，在鸡胚中培育 ６２代之后，虫株（ＴＡ６２）才变得稳定，在雏鸡在连续 传９代未见致病力恢复。柔嫩艾美耳球虫适应鸡胚 的Ｈ株缺少大量的第二代裂殖体，而正常的虫株第 二代裂殖体见于肠粘膜的固有层 。 ２．２．２早熟选育致弱 这种方法是选择球虫的亲 代虫株进行反复传代，使其生长发育周期逐渐缩短 来制取弱毒疫苗。国内外学者应用此选育方法分别 得到了堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美 耳球虫等早熟株，据报道这些早熟株的致病力低，而 免疫原性和它们的亲本株类似 ｊ。国内外学者 也有报道将鸡胚传代致弱和早熟选育的方法相结 合，通过双重致弱来减低球虫毒力的方法 Ｊ。 ２．２．３理化方法致弱 这种方法是采用各种物理 及化学的手段，如辐射、化学诱变剂或者两者结合等 方法对球虫卵囊进行处理，以使卵囊的毒力降低，再 感染畜禽使之产生免疫力。 吴兆敏等（１９９１）报道了用化学诱变剂ＮＴＧ处 理鸡的柔嫩艾美耳球虫，免疫雏鸡后可诱导保护性 免疫。Ｙｏｕｎｇ（１９９４）报道了 射线可降低球虫卵囊 的致病性及其免疫原性 Ｊ，但随着辐照后的球虫传 代次数的增加，其致病性将会恢复。国内一些研究 报道也表明， 射线辐射可以降低斯氏艾美耳球虫 的致病性，但同时也减弱其免疫原性，其程度取决于 免疫剂量 ’ 。 然而对射线辐射致弱球虫疫苗这一方法目前尚 存在着不同意见，有的学者认为射线辐射球虫卵囊 并非致弱，而是杀死了部分卵囊，使接种剂量降低， 因此动物免疫后不发病而产生免疫力，但Ｊｅｎｋｉｎｅｓ 等 筛选出 射线辐射堆型艾美耳球虫、柔嫩艾美 耳球虫和巨型艾美耳球虫的最适剂量，即不影响子 孢子侵入肠上皮细胞或对随后攻虫感染保护性免疫 反应的产生，但裂殖生殖发育受到抑制，说明辐照仍 有致弱作用，该问题有待进一步研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com
中国兽医寄生虫病 ２００８年７月 还可以使用物理诱变因素和化学试剂处理双重 致弱的方法来制取弱毒疫苗。中国农科院上海家畜 组抗原免疫鸡只能诱发对球虫病的部分保护，还不 足以在生产上有效控制田间球虫病。而球虫种类多 寄生虫病研究所以化学诱变剂环磷酸酰胺（ｃｖ）和 物理诱变因素紫外线照射对艾美耳球虫卵囊进行双 重致弱，结果表明能激发鸡对球虫感染的高度免 疫￣７３，７４］。 样，生活史复杂，基因组庞大，不同发育阶段的免疫 原性和抗原构成都有差异，各阶段都有保护性抗原， 不同种类球虫的免疫原性也不同，因此基因工程苗 的研制还需要进一步研究免疫保护机制，对不同虫 ２．３分子生物学方法 主要是通过克隆球虫基因， 建立表达性ＤＮＡ文库或者ｅＤＮＡ文库，再用不同的 种和不同阶段的保护性抗原进行鉴定和分离。 参考文献： 抗体进行筛选来制取疫苗的方法 。可用抗虫体 某一阶段抗原的单克隆抗体（ｍＡｂ）或者不同阶段 的多克隆抗体来筛选ＤＮＡ或者ｅＤＮＡ片段。 国外有的学者在建立球虫ＤＮＡ或ｅＤＮＡ文库 后，用标记的特异性寡聚核昔酸作探针，或用标记球 虫本身的ＲＮＡ、ｅＤＮＡ或ＤＮＡ作探针，筛选鸡球虫 基因 孓 Ｊ。如Ｆｉｌｅｓ根据Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ孢子囊和子孢子 表面蛋白序列设计了一组标记的特异性寡聚核昔酸 探针，筛选出了ＴＡ 基因 。 ３ 展望 经过国内外学者几十年的探索研究，已经研制 出了多种类型的球虫疫苗，目前已有４种不同类型 的球虫疫苗投入商品化生产，实验室研究工作也有 了相应的进展¨ 。 目前已有商品化生产的是强毒疫苗和弱毒疫 苗。强毒疫苗的免疫力虽然强，但本身致病性严重， 使用过程中容易引起畜禽发病，需要一整套相应的 技术措施进行保护，因而目前只适合于条件较好的 鸡场和兔场。为了解决强毒疫苗的致病性问题，对 接种数量的控制研究和配套使用药物控制其繁殖量 将是今后的重点方向。弱毒疫苗中以早熟致弱疫苗 较为稳定，目前应用也较多，但早熟株的返祖性问题 一直存在，而且这一类研制方法过程比较繁复，造成 了疫苗的成本较高，使得疫苗的价格并不比抗球虫 药低。因此，探索方法较为简便、成本较低的致弱技 术有着重要的意义。在当前球虫的弱毒疫苗研究 中，辐照致弱方法存在着一定的争议，对于其作用是 否明显还有很多疑问，而使用化学试剂致弱的报道 相对较少，作为一条研制球虫弱毒疫苗的重要思路， 使用化学方法致弱今后将有着乐观的前景。同时， 采用多重致弱方法，可以使球虫卵囊的毒性更大的 降低，使试验动物获得更强的免疫力，因而化学试剂 在这方面也应有更多的应用。 作为一种新兴的技术，基因工程疫苗具有高效 低毒、易保存等很多优点，但目前的研究表明，用重 ［１］张龙现，张秀根，孙智峰．鸡球虫疫苗的研究进展 ［Ｊ］．外国畜牧学．猪与禽．１９９４（６）：３４．３７． ［２Ｊ Ｐｅｔｅｒ Ｌ．球虫生物学［Ｍ］．蒋金书译．南宁：广西科学 技术出版社，１９９１． ［２］ 翁亚彪，林辉环．鸡球虫虫苗的研究概况［Ｊ］．．养禽 与禽病防治，１９９５（１）：９・１Ｏ． ［３］韩春来，汪明，王茂荣．鸡球虫苗的研制与应用［Ｊ］．． 山东家禽，２０ｏ４（１１）：３８４１． ［４］ 刘群．柔嫩艾美耳球虫早熟选育及ＲＡＰＤ在鸡球虫虫 种和株鉴定上的应用［Ｊ］．．中国农业大学博士论文， １９９８：１４－２７． ［５］ 李秉鸿．畜牧兽医科技信息．１９９６（９）：６． ［６］李国清．翁亚彪．林辉环．鸡球虫强毒虫苗的研制 ［Ｊ］．养禽与禽病防治．１９９８（８）：２６－２７． ［７］ 樊生超．姚惠娟．艾美耳球虫弱毒虫株的返祖性［Ｊ］． 上海农业学报．１９９６，１２（４）：６３－６５． ［８］吴德铭，毕英佐，于康震，等．鸡球虫基因工程疫苗研 究进展［Ｊ］．动物医学进展．２００４，２５（１）：５７－６０． ［９］ 李祥瑞，汪志楷．斯氏艾美耳球虫体外脱囊过程中孢 子囊余体的形态学和组织化学的研究［Ｊ］．河南农业 大学学报，１９９０，２４（３）：３２７—３３１． ［１Ｏ］索勋，孔繁瑶，李安兴．斯氏艾美耳球虫子孢子的移 行途径［Ｊ］．畜牧兽医学报，１９９４，２５（３）：２５２－２５５． ［１１］Ｔｓａｉ Ｓ Ｆ，Ｗａｎｇ Ｊ Ｓ．Ｒｏｕｔｅ ｏｆ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｔｉｅ— ｄａｉ ｓｏｐｒｏｚｏｉｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｉｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｖｅｔ Ｓｃｉ，１９９４，２０ （１）：５１－５７． ［１２］ Ｗａｎｇ Ｊ Ｓ，Ｔｓａｉ Ｓ Ｆ．Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ Ｅｉｎｅｒｉａ ｓｔｉｅ－ ｄａｉ ｉｎ Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅ ｒａｂｂｉｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｉｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，１９（１）：６６－７２． 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Ｓ．Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｍｂｉｎａｎｔ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍｔｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｅｉ－ ｔｒｖｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｌｉｃｉｔｓ ｐａｒｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｅｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，７０：５０． ［２２］ Ｃｈａｐｍａｎ Ｈ Ｄ，Ｃｈｅｒｒｙ Ｔ Ｅ，Ｄａｎｆｏｒｔｈ Ｈ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｓ— ｔａｉｎａｂｌｅ ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｐｏｕｌｔｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆｌｉｖｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｐａｒａｓｉｔｏ１．２００２，３２：６１７－６２９． ［２３］ 颜世敢，崔道实．鸡球虫疫苗的免疫机理和正确使用 ［Ｊ］．山东家禽．２００３，９：２７—２８． ［２４］ 马衍忠，舒桂良，王海生．鸡球虫疫苗免疫及保护效 果［Ｊ］．天津农学院学报．１９９５，２（４）：３８－４１． ［２５］ 李秉鸿，李筠．鸡球虫疫苗研究进展［Ｊ］．中国家禽． １９９６，５：３４—３６． ［２６］ 余永鹏，魏文康，黄应开．鸡球虫疫苗在田间应用的 试验总结［Ｊ］．畜禽业．２００４，１０：７－８． ［２７］ 韩红玉，黄兵．鸡球虫重组疫苗的研究进展［Ｊ］．生物 技术通报．２０００，６：１８－２３． ［２８］ 张伟信，张西臣，喻建军．鸡柔嫩艾美耳球虫免疫保 护性研究［Ｊ］．塔里木农垦大学学报．２００４，１６（４）：２０． ２３． ［２９］ 秦睿玲，张西臣，李建华，等．鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗 候选基因在大肠杆菌中的表达［Ｊ］．中国寄生虫病防 治杂志．２００４，１７（１）：４９－５２． ［３０］ 韩谦，汪明，蒋金书，等．朱引洁．球虫活苗的实验室 免疫效果研究［Ｊ］．中国兽医杂志．１９９４，２０（１１）：４８． ４９． ［３１］ 臧为民，宁长申，张龙现，等．球虫抗药性检测和高效 抗球虫药物的筛选与应用［Ｊ］．河南农业科学．２００３， ９：６３－６５． ［３２］ 程金科，殷嘉树．球虫免疫机制研究进展［Ｊ］．寄生虫 与医学昆虫学报．１９９４，１（１）：６１－６７． ［３３］ 姚惠娟，缪德年，樊生超．球虫疫苗的研究现状及应 用［Ｊ］．上海畜牧兽医通讯．２００２，２：２４． 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张龙现，殷佩云，林昆华，等．我国家兔球虫的研究现 状［Ｊ］．动物学杂志，１９９９，３４（５）：４５．５２． ［５１］ 曾智勇，刘建国，梁海英．我国肝球虫研究现状［Ｊ］． 四川畜牧兽医，２００３，（１１）：２８－２９． ［５２］ 张龙现，张百灵．家兔球虫的单卵囊分离和感染技术 研究［Ｊ］．河南畜牧兽医，１９９５，１６（４）：５－７． ［５３］ 宋翠平，沈永林，汪志楷．鸡球虫体外细胞培养的研 究进展［Ｊ］．中国动物检疫，１９９８，１５（２）：４６＿４８． ［５４］ 郭明生，郭建军．不同化学药物抑杀兔球虫卵囊试验 维普资讯 http://www.cqvip.com －——４０．—— 中国兽医寄生虫病 ２００８年７月 ［Ｊ］．中国养兔杂志，１９９４，（４）：８－９． ［５５］顾有方，陶爱香，康健，等．堆型艾美耳球虫卵囊的分 离与纯化［Ｊ］．安徽技术师范学院学报，２００３，１７（１）： １．３． ［５６］ 陶建平，辛玲，李文超，等．巨型艾耳球虫（Ｅｉｍｅｉｒａ ｍａｘｉｍａ）地理株研究Ｉ．１１株巨型艾美耳球虫的分离 与基本特征［Ｊ］．中国兽医学报，２００４，２４（４）：３４９— ３５２． ［５７］索勋，孔繁瑶，李安兴，等．斯氏艾美耳球虫大配子发 育及其超微结构［Ｊ］．寄生虫与医学昆虫学报，２００３， ｌ０（４）：２０２—２０６． ［５８］ 张龙现，林昆华，杨汉春，等．家兔黄艾美耳球虫血清 抗体ＥＬＩＳＡ检测法的建立［Ｊ］．中国兽医学报．１９９５， ｌ５（２）：１４９—１５２、 ［５９］ 李祥瑞，汪志楷．斯氏艾美耳球虫细胞化学的研究 ［Ｊ］．畜牧兽医学报 １９８９，２０（４）：３４９－３５３． ［６０］ 李祥瑞，汪志楷．斯氏艾美耳球虫感染兔肝脏的组织 化学变化［Ｊ］．中国养兔杂志，１９８９（４）：２０—２２． ［６１］ Ｗａｎｇ Ｊ Ｓ，Ｃｈａｎｇ Ｌ Ｔ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｈａｅ ｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａ ｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｅｉｍ— ｅｒｉａ ｓｔｉｅｄａｉ［Ｊ］．Ｔａｉｗａｎ Ｊ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｎｉｍ Ｈｕｓ，１９９５，６５ （１）：１—１０． ［６２］Ｊｏｈｎ Ｍ．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｈａｒｌｏｗ Ｈ．Ｄａｒｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｃ．Ｆｒａｎｄｓｅｎ． Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｄｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐａｒ— ａｓｉｔｉｃ ｐｒｏｔｏｚｏａｎ Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｔｉｅｄａｉ（Ｃｏｃｃｉｄｉａ）［Ｊ］．Ｃｏｍｐ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐａｒｔ Ｂ：Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９８２，７３ （２）：２２１—２２９． ［６３］Ｄｒｏｎｅｔ—ｒｉａｒｄ Ｆ，Ｃｏｕｄｅｒｔ Ｐ，Ｌｉｃｏｉｓ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａｃｑｕｉｒｅｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃａｎｉｃｕｌｕｓ）ａｇａｉｎｓｔ ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ｏｆ Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｇｎａ： Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｏｓｅ ａｎｄ ａｇｅ ａｔ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ ｊ．Ｖｅｔ Ｐａｒａｓｉｔｏ１．１９９７，６９（３＿４）：１９７—２０１． ［６４］ Ｖａｎｐａｒｉｊｓ Ｏ，Ｈｅｒｍａｎｓ Ｌ，Ｖａｎ Ｄｅｒ Ｆｌａｅｓ’ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｉｃａ— ｃｙ ｏｆ ｄｉｃｌａｚｕｒｉｌ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｕｒｅ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｎａｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ［Ｊ］．Ｖｅｔ Ｐａｒａｓｉｔｏ１． １９８９，３２（２－３）：１０９—１１７． ［６５］Ｎｊｅｎｇａ Ｍ Ｊ，Ｍａｎｕｅｌ Ｅ Ｒ Ｚ，Ｔｏｍｏｍｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉ— ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ｏｎ Ｅｉｍｅｒｌａ ｓｔｉｅｄａｉ ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｏｒ［Ｊ］． Ｖｅｔ Ｐａｒａｓｉｔｏ１．１９９９，８ １（２）：９９—１０５． ［６６］ Ｓ．Ｈａｎａｄａ，Ｙ．Ｏｍａｔａ，Ｙ．Ｕｍｅｍｏｔｏ，Ｙ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ“， Ｈ．Ｆｕｒｕｏｋａ，Ｔ．Ｍａｔｓｕｉ，Ｒ．Ｍａｅｄａ ａｎｄ Ａ．Ｓａｉｔｏ．Ｒｅｌａ－ ｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｔｉｅｄａｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｓｏｌｕ— ｂｌｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｒｆｏｍ ｔｈｅ ｂｉｌｅ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｒａｂｂｉｔｓ［Ｊ］．Ｖｅｔｅｒ－ ｉｎａｒｙ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．２００３，１１１（２－３）：２６１—２６６． ［６７］ Ｗａｔａｎａｂｅ Ｈ，Ｋｏｙａｍａ Ｔ，Ｏｍａｔａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｉｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｔｉｅｄａｉ ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｔｈｒｏｍ－ ｂｏｓｐｏｎｄｉｎ—ｒｅｌａｔｅｄ ｍｏｔｉｆ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｎｔｒｙ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．２００１，９９（４）：２８７—２９５． ［６８］ 黄兵，吴薛忠，赵其平，等．ＩＭＭＵＣＯＸ球虫疫苗对后 备蛋鸡的安全有效性试验［Ｊ］．中国兽医寄生虫病． １９９８，６（１）：２５—２７． ‘［６９］ 秦建华，赵月兰 张明勇 庞向红．堆型艾美耳球虫早 熟减毒株裂殖子的细胞培养［Ｊ］．中国兽医寄生虫 病．２０００，８（１）：２０—２１． ［７０］ Ｌｉｌｌｅｈｏｊ Ｈ Ｓ，Ｊｅｎｋｉｎｓ Ｍ Ｃ，Ｂａｃｏｎ Ｌ Ｄ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｇｅｎｓ ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ ｆｏｌ－ ｌｏｗｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｍｅｒｏｚｏｉｔｅ．Ｉｍ— ｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９０，７１：１２７—１３２． ［７１］ 陈明勇，蒋金书，汪明．鸡柔嫩艾美耳球虫活虫苗免 疫预防的研究．中国兽医科技．１９９６，２６（９）：３０—３１． ［７２］ Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｊ．ａｎｄ Ｒｅｉｄ，Ｗ．Ｍ．，Ｅｘｐ Ｐａｒａｓｉｔｏｌ １９７０，２８：３０— ３６． ［７３］ 苏华炜，李玉焕，邹晖，等．艾美耳球虫双重致弱株与 强毒株遗传特性的比较研究［Ｊ］．中国兽医寄生虫 病．１９９７，５（４）：１２—１５． ［７４］ 苏华炜，李玉焕，邹晖，等．Ｅ—ｔｅｎｅｌｌａ致弱虫株免疫原 性的研究［Ｊ］．中国兽医寄生虫病．１９９７，５（３）：１７— １９． ［７５］ Ｆｌｉｅｓ Ｊ Ｇ，Ｐａｕｌ Ｌ Ｓ，Ｊｅｆｆｒｅｙ Ｄ Ｇ．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒ－ ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｆｏｒ ａ ｍａｊｏｒ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ Ｅｌ－ ｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ．Ｉｎ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｏｆ Ｐａｒａｓｉｔｉｃ Ｉｎｖａ— ｓｉｏｎ，ＵＣＬＡ Ｓｙｍｐｏｓｉａ ｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， １９８７．Ｎｅｗ Ｓｅｒｉｅｓ．４２：７１３—７２３．
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