(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 105181861 A (43)申请公布日 2015.12.23
(21)申请号 201510203620.X(22)申请日 2015.04.24
(71)申请人上海应用技术学院
地址200235 上海市徐汇区漕宝路120号(72)发明人潘仙华 陈思羽 张瑞敏 于一文
王亚萍 史尧 刘烽(74)专利代理机构上海申汇专利代理有限公司
31001
代理人吴宝根 马文峰(51)Int.Cl.
G01N 30/88(2006.01)
权利要求书1页 说明书3页 附图3页
(54)发明名称
一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法(57)摘要
本发明公开一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，即首先将3-氨基吡咯烷盐酸盐样品进行柱前衍生，与Boc酸酐反应得到具有紫外吸收的Boc-3-氨基吡咯烷；然后将Boc-3-氨基吡咯烷用水相稀释成浓度为0.4-0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷溶液，使用高效液相色谱仪对其进行高效液相分析，用Phenomenex C18 Gimini色谱柱为色谱柱，进样量10μL，流速0.8-1mL/min，检测波长210nm，色谱柱温25℃，以反向流动相系统进行洗脱，利用面积归一法计算得到3-氨基吡咯玩盐酸盐的纯度。该分析方法时间较短、灵敏度高、准确度高、分析所用成本低，分析方法方便可行。 C N 1 0 5 1 8 1 8 6 1 A CN 105181861 A
权 利 要 求 书
1/1页
1.一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，其特征在于步骤如下：
（1）、将3-氨基吡咯烷盐酸盐样品进行柱前衍生，与Boc酸酐反应，得到具有紫外吸收的Boc-3-氨基吡咯烷；
（2）、将步骤（1）所得的Boc-3-氨基吡咯烷用水相稀释成浓度为0.4 -0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷溶液；
所述的水相为pH为2-3的磷酸二氢钾水溶液；（3）、使用高效液相色谱仪，对上述所得的浓度为0.4-0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷溶液进行高效液相分析，根据所得的高效液相色谱图的峰面积利用面积归一法计算3-氨基吡咯烷盐酸盐的纯度；
色谱分析所用的色谱柱为Phenomenex C18 Gimini色谱柱，进样量为10μL，控制流速为0.8-1mL/min，检测波长为210nm，色谱柱柱温为25℃，以水相与有机相组成的反向流动相系统进行洗脱；
所述的水相与有机相所组成的反相流动相系统由水和甲醇按体积百分比计算，即水：甲醇为20-25%：75-80%组成的混合溶液。
2.如权利要求1所述的一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，其特征在于步骤（1）中所述的3-氨基吡咯烷盐酸盐柱前衍生，与Boc酸酐反应，即将3-氨基吡咯烷盐酸盐、甲醇、三乙胺和Boc酸酐放入三口烧瓶中，室温下反应8h后旋干，
即得Boc-3-氨基吡咯烷；上述3-氨基吡咯烷盐酸盐、甲醇、三乙胺和Boc酸酐的用量，按照摩尔比计算，即3-氨基吡咯烷盐酸盐：甲醇：三乙胺：Boc酸酐为1:4:3:1.2。
3.如权利要求1或2所述的一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，其特征在于所用的高效液相色谱仪为：DIONEX UltiMate 3000 Pump，UltiMate 3000 Autosampler，UltiMate 3000 Column Compartment，UltiMate 3000 Photodiode Array Detector。
4.如权利要求1或2所述的一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，其特征在于使用的检测器为紫外检测器。
2
CN 105181861 A
说 明 书
1/3页
一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方
法
技术领域
本发明涉及一种高效液相分析检测方法，具体涉及一种利用柱前衍生对3-氨基
吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，即首先将3-氨基吡咯烷盐酸盐进行柱前衍生，与Boc酸酐反应，得到具有紫外吸收的衍生物，再通过高效液相色谱法，利用Phenomenex C18 Gimini 色谱柱，紫外检测器，高效液相色谱仪进行分析。
[0001]
背景技术
1、3-氨基吡咯烷及其各类衍生物是重要的精细化工中间体，广泛应用于农药、医药、精细化学品等合成，具有良好的市场前景。3-氨基吡咯烷的二盐酸盐和乙酰化物是合成托氟沙星和其它喹诺酮类抗菌药的关键中间体。目前，国内3-氨基吡咯烷主要用于制药方面。通过3-氨基吡咯烷可以合成具有杀菌作用的诺氟沙星、克林沙星、AB-T719等喹诺酮类抗菌药；而具有光学活性的3-氨基吡咯烷乙酰化衍生物是农业化学品和药物活性物质（例如乙烯基吡咯烷酮-头饱菌素衍生物）的重要中间体。因此开发3-氨基吡咯烷以及其它的一些衍生物快捷方便的纯度检测分析方法是很有必要的。
[0003] 目前未见关于3-氨基吡咯烷盐酸盐的分析方法的文献报道，鉴于其在精细化工应用中的重要性以及广泛性，开发一种简单高效的分析检测方法是十分必要的。
[0002]
发明内容
本发明目的是为了开发出一种3-氨基吡咯烷盐酸盐分析检测的方法。3-氨基吡咯烷盐酸盐本身不具有紫外吸收，直接对其进行纯度检测较为麻烦且不准确。经过我们的不断研究， 发现采取柱前衍生，与Boc酸酐反应的方法，得到Boc-3-氨基吡咯烷，具有紫外吸收，能够利用紫外检测器进行检测。使用简单的高效液相色谱仪以及常见的分析试剂就能够对柱前衍生后的样品进行分析。该分析方法具有操作简单，试剂方便易获得，实验过程中不易带入杂质，检测过程快速且灵敏度高等优点。[0005] 本发明的技术方案
一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，具体包括如下步骤：（1）、将3-氨基吡咯烷盐酸盐样品进行柱前衍生，与Boc酸酐反应，得到具有紫外吸收的Boc-3-氨基吡咯烷；
所述的3-氨基吡咯烷盐酸盐柱前衍生，与Boc酸酐反应，即将3-氨基吡咯烷盐酸盐、甲醇、三乙胺和Boc酸酐放入三口烧瓶中，室温下反应8h后旋干，即得Boc-3-氨基吡咯烷；
上述3-氨基吡咯烷盐酸盐、甲醇、三乙胺和Boc酸酐的用量，按照摩尔比计算，即3-氨基吡咯烷盐酸盐：甲醇：三乙胺：Boc酸酐为1:4:3:1.2；
（2）、将步骤（1）所得的Boc-3-氨基吡咯烷盐酸盐用水相和有机相混合成的溶液稀释成浓度为0.4-0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷盐酸盐溶液；所述的水相为pH为2-3的磷酸二氢钾水溶液；
[0004]
3
CN 105181861 A
说 明 书
2/3页
（3）、使用高效液相色谱仪，对上述所得浓度为0.4-0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷溶液进行高效液相分析，根据所得的高效液相色谱图的峰面积利用面积归一法计算3-氨基吡咯烷盐酸盐的纯度；
色谱分析所用的色谱柱为Phenomenex C18 Gimini色谱柱，进样量为10μL，控制流速为0.8-1mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为210nm，色谱柱柱温为25℃，以水相与有机相组成的反向流动相系统进行洗脱；
所述的水相与有机相所组成的反相流动相系统由水和甲醇按体积百分比计算，即水：甲醇为20-25%：75-80%组成的混合溶液。[0006] 本发明的有益技术效果
本发明的一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，采用了柱前衍生与高效液相色谱相结合的技术方案。通过柱前衍生，使得3-氨基吡咯烷盐酸盐具有紫外吸收，因此能够利用紫外检测器进行检测。在实验研究便捷性，实验成本控制，实验时间控制等方面有很好的的技术效果。同现有的气相分析方法相比较，在实验的研究便捷性上，样品处理更加简单；在成本控制上，更加节省能源，实验材料也相对便宜；在时间控制上更加快速，气相分析方法一般需要60min左右，而本发明的分析时间仅需10min，能够准确检测出3-氨基吡咯烷盐酸盐物质含量以及杂质含量，对
样品提纯跟踪检测提供了一种非常便捷直观的检测方法。附图说明
图1、标准的Boc-3氨基吡咯烷在检测波长为210nm处所得的液相色谱图；图2、3、4、5、6分别为实施例1中对Boc-3-氨基吡咯烷溶液分别在检测波长为210nm、220nm、239nm、254nm、260nm所得的液相色谱图。
[0007]
具体实施方式
[0008] 下面通过具体的实施例对本发明做详细的阐述，但本发明并不限于下述的实施例。
[0009] 本发明实施例中所用的高效液相色谱仪为DIONEX UltiMate 3000 Pump，UltiMate 3000 Autosampler，UltiMate 3000 Column Compartment，UltiMate 3000 Photodiode Array Detector。
[0010] 标准的Boc-3氨基吡咯烷在检测波长为210nm处所得的液相色谱图如图1所示，色谱分析条件如下：
所用色谱柱为Phenomenex C18 Gimini 柱，进样量为10μL，控制流速为0.8-1mL/min，在检测波长为210nm，色谱柱柱温为25℃，以水相与有机相组成的反向流动相系统进行洗脱；
所述的水相与有机相所组成的反相流动相系统由水和甲醇按体积百分比计算，即水：甲醇为25%：75%组成的混合液。
[0011]
实施例1一种利用柱前衍生对3-氨基吡咯烷盐酸盐进行分析的方法，具体包括如下步骤：（1）、将3-氨基吡咯烷盐酸盐样品进行柱前衍生，与Boc酸酐反应，得到具有紫外吸收
4
CN 105181861 A
说 明 书
3/3页
的Boc-3-氨基吡咯烷；
所述的3-氨基吡咯烷盐酸盐柱前衍生，与Boc酸酐反应步骤如下：将铁架台放在桌子上，磁力搅拌器放在铁架台上，将50mL的单口瓶放在磁力搅拌器上，内置一个磁子，然后将3-氨基吡咯盐酸盐（1.59g，10mmol）放入其中，再加入甲醇（10mL，40mmol）搅拌至溶清，然后加入三乙胺（3.04g，30mmol），室温搅拌15min，随即滴加Boc酸酐（2.62g，12mmol），室温下进行反应8h，所得的反应液在温度为40-45℃，压力为-0.09MPa条件下进行减压蒸馏，来除去未反应完的甲醇，即得Boc-3-氨基吡咯烷，其反应过程方程式如下所示：
；
上述3-氨基吡咯烷盐酸盐、甲醇、三乙胺和Boc酸酐的用量，按照摩尔比计算，即3-氨基吡咯烷盐酸盐：甲醇：三乙胺：Boc酸酐为1:4:3:1.2；
（2）、将步骤（1）所得的Boc-3-氨基吡咯烷用水相稀释成浓度为 0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷溶液；
所述的水相是把1.02g磷酸二氢钾溶解于500mL水中得到磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调节pH为2-3；
（3）、使用高效液相色谱仪，对上述所得的Boc-3-氨基吡咯烷溶液进行高效液相分析，色谱分析所用色谱柱为Phenomenex C18
Gimini 柱，进样量为10μL，控制流速为0.8-1mL/min，分别在检测波长为210nm、220nm、239nm、254nm、260nm，色谱柱柱温为25℃，以水相与有机相组成的反向流动相系统进行洗脱，在检测波长为210nm、220nm、239nm、254nm、260nm所对应的色谱图分别如图2、图3、图4、图5和图6所示，从上述五个附图中可以看出210nm波长下吸收峰最高，且主峰与杂质峰能够达到基线分离；
根据图1中的标准的Boc-3氨基吡咯烷的液相色谱图和上述Boc-3-氨基吡咯烷溶液在210nm波长下检测所得的吸收峰的峰面积，利用面积归一法计算3-氨基吡咯烷盐酸盐的纯度，能够准确得到3-氨基吡咯烷盐酸盐的含量百分比及其杂质百分比，其结果为3-氨基吡咯烷盐酸盐纯度为99.86%，杂质分别为0.06%和0.08%。
[0012] 所述的水相与有机相所组成的反相流动相系统由水和甲醇按体积百分比计算，即水：甲醇为25%：75%组成的混合液。
[0013] 以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。
5
CN 105181861 A
说 明 书 附 图
1/3页
图 1
图 2
6
CN 105181861 A
说 明 书 附 图
2/3页
图 3
图 4
7
CN 105181861 A
说 明 书 附 图
3/3页
图 5
图 6
8